Recombinant Protein A Sepharose FF Gravity Prepacked Column
| 【Numbering】BK-NRPB01S | 【CAS】CAS | ||
| 【Item No.】BK-NRPB01S-Z25 | 【specification】 | ||
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品 名： 重組蛋白A瓊脂糖凝膠FF
英文名： Recombinant Protein A NUPharose Fast Flow, rProtein A NUPharose FF
目錄號(hào)： NRPB01L、NRPB01S(預(yù)裝柱)
規(guī) 格： 20 ml，100 ml，1 L，1 ml預(yù)裝柱，5 ml預(yù)裝柱，特殊規(guī)格訂制
運(yùn) 輸： 2 ~ 25℃，常壓、避光
貯 存： 20%乙醇，2 ~ 8℃
保質(zhì)期： 3 年
相關(guān)介紹：
蛋白A是一種金黃色葡萄球菌細(xì)胞壁蛋白質(zhì)，包含有5個(gè)區(qū)域，可以同IgG的Fc片段結(jié)合。作為一個(gè)親和配基，蛋白A能夠比較緊密地偶聯(lián)到NUPharose上，使得這些區(qū)域可以同游離的IgG自由結(jié)合。一分子的蛋白A可以結(jié)合兩分子的IgG。
技術(shù)指標(biāo)：
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基質(zhì) |
4%高度交聯(lián)瓊脂糖凝膠 |
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配基 |
重組蛋白A |
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配基密度 |
≥ 6 mg/ml |
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填料粒徑 |
60 ~ 180 μm |
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最大流速 |
800 cm/h |
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推薦流速 |
20 ~ 100 cm/h |
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pH穩(wěn)定性 |
pH 3 ~ 9 |
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耐反壓 |
0.3 MPa |
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載量 |
≥40 mg/ml IgG |
抗體與蛋白A、蛋白G的結(jié)合力：
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種類(lèi) Species |
亞型 Antibody Class |
蛋白A Protein A |
蛋白G Protein G |
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人 Human |
IgG1 IgG2 IgG3 IgG4 IgM IgD IgA Fab |
+++ +++ + +++ + - + + |
+++ +++ +++ +++ - - - + |
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小鼠 Mouse |
IgG1 IgG2a IgG2b IgG3 IgM |
+ +++ +++ +++ - |
++ +++ +++ +++ - |
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大鼠 Rat |
IgG1 IgG2a IgG2b IgG2c |
+ - - +++ |
++ +++ + +++ |
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牛 Cow |
IgG1 IgG2 |
+ +++ |
+++ +++ |
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山羊 Goat |
IgG1 IgG2 |
+ +++ |
+++ +++ |
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馬 Horse |
IgG(ab) IgG(c) IgG(T) |
+ + - |
- - +++ |
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兔Rabbit |
IgG |
+++ |
+++ |
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豬Pig |
IgG |
+++ |
+ |
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狗Dog |
IgG |
+++ |
+ |
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雞Chicken |
IgY |
- |
- |
注：-表示不結(jié)合；+表示微弱結(jié)合；++表示中等結(jié)合；+++表示很強(qiáng)結(jié)合。
應(yīng)用舉例：
結(jié)合緩沖液：20 mM磷酸緩沖液，150 mM NaCl，pH 7.4
洗脫緩沖液：0.1 M檸檬酸緩沖液，pH 4.0
中和緩沖液：1 M Tris ~ HCl，pH 9.0
1)1 ml重組蛋白A瓊脂糖凝膠預(yù)填柱用5 ~ 10個(gè)柱床體積的蒸餾水洗去保存液；
2)用結(jié)合緩沖液結(jié)合緩沖液平衡 5 ~ 10個(gè)柱床體積；
3)將5 ml兔多抗血清用結(jié)合緩沖液稀釋到50 ml，0.45 μm濾膜過(guò)濾上樣；
4)用結(jié)合緩沖液再洗 5 ~ 10個(gè)柱床體積；
5)用洗脫緩沖液洗脫抗體，收集洗脫峰，并用中和緩沖液調(diào)節(jié)其pH至中性；
6)每次使用后用3 ~ 5個(gè)柱床體積的0.1 M 檸檬酸緩沖液（pH 3.0）再生清洗；
7)SDS-PAGE（圖1）電泳分析洗脫下來(lái)的兔多抗純度在95%以上。
圖 1
注意事項(xiàng)：
1)預(yù)填柱使用簡(jiǎn)易方便，在沒(méi)有儀器設(shè)備的條件下也可以完成純化任務(wù)。
2)樣品洗脫后一般pH很低，應(yīng)立即用堿性中和緩沖液（如1 M Tris-HCl，pH 9.0）將收集到的抗體溶液中和到中性，或在收集容器中事先裝5% ~ 20%、pH 7 ~ 9的緩沖液（如1 M Tris-HCl或1 M 磷酸緩沖液），以利于維持抗體的生物活性，避免抗體失活。
3)使用時(shí)保證柱子和緩沖液的溫度一致，避免柱床內(nèi)產(chǎn)生氣泡，影響純化效果，如果已經(jīng)產(chǎn)生氣泡，可以自行重裝柱子。
4)通常（每次）目標(biāo)樣品洗脫后應(yīng)繼續(xù)用0.1 M檸檬酸緩沖液（pH 2 ~ 3）洗3 ~ 5個(gè)柱體積，然后用平衡緩沖液清洗5個(gè)柱體積以上，作簡(jiǎn)易再生。
5)使用數(shù)次后應(yīng)進(jìn)行在位清洗，建議用0.1% Triton X-100 37℃洗1 ~ 3個(gè)柱體積（10 ~ 30 min），立即用平衡緩沖液清洗5個(gè)柱體積以上；或70%乙醇洗5個(gè)柱體積以上（可保持4 ~ 16 h），再用平衡緩沖液清洗5柱體積以上。在位清洗能去除強(qiáng)疏水性蛋白質(zhì)和脂類(lèi)，恢復(fù)柱子的載量和流速。
6)
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推薦流速 |
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預(yù)裝柱體積（ml） |
1 ml |
5 ml |
10 ml |
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流速(ml/min) |
0.2 |
1 |
2 |
導(dǎo)購(gòu)指南
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中文名 |
英文簡(jiǎn)稱(chēng) |
貨號(hào) |
規(guī)格 |
產(chǎn)品描述 |
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重力預(yù)裝柱 |
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重組蛋白A瓊脂糖凝膠FF重力預(yù)裝柱 |
ProA NUPharose FF pre-packed column |
NRPB01S-Z11 |
1*1mL |
1支*1ml |
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NRPB01S-Z41 |
4*1mL |
4支*1ml |
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NRPB01S-Z15 |
1*5mL |
1支*5mL |
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NRPB01S-Z25 |
2*5mL |
2支*5mL |
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AKTA中壓預(yù)裝柱 |
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重組蛋白A瓊脂糖凝膠FF中壓預(yù)裝柱 |
ProA NUPharose FF pre-packed column |
NRPB01S-Y11 |
1*1mL |
1支*1ml |
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NRPB01S-Y41 |
4*1mL |
4支*1ml |
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NRPB01S-Y15 |
1*5mL |
1支*5mL |
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NRPB01S-Y25 |
2*5mL |
2支*5mL |
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填料 |
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重組蛋白A瓊脂糖凝膠FF |
ProA NUPharose FF |
NRPB01L-10 |
10mL |
1瓶*10ml |
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NRPB01L-20 |
20mL |
1瓶*20ml |
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NRPB01L-100 |
100mL |
1瓶*100ml |
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NRPB01L-500 |
500ml |
1瓶*500ml |
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