NHS-瓊脂糖凝膠FF
| 【編號】BK-NRPB11L | 【CAS號】CAS | ||
| 【貨號】BK-NRPB11L-500 | 【規(guī)格】 | ||
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品 名：NHS-瓊脂糖凝膠FF
英文名：NHS Activated NUPharose Fast Flow, NHS NUPharose FF
目錄號：NRPB11L
規(guī) 格：1ml，10 ml，100 ml，1L，特殊規(guī)格訂制
運 輸：2 ~ 25℃，常壓、避光
貯 存：100%異丙醇，-20℃
保質(zhì)期：1年
相關(guān)介紹：
NHS-瓊脂糖凝膠FF是一種將瓊脂糖凝膠微球用NHS活化形成的生物親和層析分離介質(zhì)。該產(chǎn)品保留了瓊脂糖極好的親水性及大網(wǎng)架結(jié)構(gòu)，與生物活性大分子有很好的相容性，具有載量高，非特異性吸附少，流速快等特點。本活化的瓊脂糖凝膠能溫和的與氨基基團反應(yīng)，特別適合偶聯(lián)抗體、鏈霉親和素、酶、核酸等功能性生物大分子。
技術(shù)指標(biāo)：
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外觀 |
乳白色半透明凝膠狀凝膠 |
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基質(zhì) |
4%瓊脂糖凝膠 |
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配體 |
NHS |
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配體密度 |
≥15 μmol/mL |
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蛋白質(zhì)載量 |
≥10 mg/ml IgG |
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耐反壓 |
0.3 MPa |
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粒徑范圍 |
60 ~ 180μm |
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工作溫度 |
4 ~ 40℃ |
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基質(zhì)pH穩(wěn)定性 |
3 ~ 12（長時間）；2 ~ 14（短時間） |
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基質(zhì)化學(xué)穩(wěn)定性 |
在以下溶液中穩(wěn)定：常用的水相緩沖液；1 mol/L NaOH；1 mol/L乙酸（pH 4.0）；6 mol/L鹽酸胍；70%乙醇。 |
應(yīng)用實例：
實驗名稱：NHS-瓊脂糖凝膠FF偶聯(lián)抗體。
實驗步驟：
1. 配制抗體：取100 mg IgG加10 ml 偶聯(lián)緩沖液(0.2 M NaHCO3, 0.5 M NaCl, pH 8.3)溶解，留0.1 ml以便測定偶聯(lián)效率。
2. 偶聯(lián)反應(yīng)：取10 ml NHS-瓊脂糖凝膠FF，用50 ml 1 mM HCl分三次清洗去除保存液，清洗后立即加入抗體偶聯(lián)溶液中，4℃，震蕩反應(yīng)6 小時或者過夜，進行偶聯(lián)反應(yīng)。
3. 封閉：濾出反應(yīng)液，用50 ml偶聯(lián)緩沖液清洗偶聯(lián)后的凝膠，然后用10 ml封閉緩沖液(0.2 M NaHCO3, 0.5 M NaCl, 0.5 M 乙醇胺, pH 8.3)，室溫震蕩4 小時（或者過夜）封閉未偶聯(lián)的基團，封閉后用20 ml蒸餾水洗干凈即可。
4. 檢測：偶聯(lián)前后的反應(yīng)液用SDS-PAGE檢測對比偶聯(lián)效率，偶聯(lián)好的填料根據(jù)配基特性測定功能和載量。
注意事項：
1. 如果配基的穩(wěn)定性不了解，可以選擇不同pH的緩沖液和溫度，用配基相應(yīng)濃度的溶液0.5 ~ 1 ml，不加填料模擬偶聯(lián)條件，觀察溶液是否會產(chǎn)生沉淀。有沉淀產(chǎn)生對應(yīng)的偶聯(lián)效果就不好，可以稍微降低pH或溫度，同時可以加5%左右的甘油或PEG保護蛋白，避免產(chǎn)生沉淀，總之對于任何配基最好能了解其溶解性及穩(wěn)定性，避免實驗失敗導(dǎo)致?lián)p失。
2. 如果偶聯(lián)的配基不穩(wěn)定，可在搖床上4℃振搖偶聯(lián)1 ~ 12小時，以維持配基的活性。偶聯(lián)配基后盡快清洗填料，避免在高pH 條件中，配基失活。
3. 更穩(wěn)定的配基可以直接溶解于0.2 M碳酸氫鈉，可適當(dāng)提高溫度，如室溫，偶聯(lián)時間則相應(yīng)可縮短至1 ~ 2 小時。
4. 偶聯(lián)蛋白的較適pH為7.5 ~ 9.0，在室溫或4℃均可，提高溫度能增加配基的偶聯(lián)效率，根據(jù)蛋白的穩(wěn)定性選擇合適的pH 和溫度。偶聯(lián)蛋白溶液的濃度以5 ~ 15 mg/ml較佳。凝膠體積和配基溶液的體積比以1:0.5 ~ 1:2.0較佳。
5. 偶聯(lián)的緩沖液可以是碳酸鹽、硼酸鹽和磷酸鹽緩沖液，但絕對不能使用氨基的緩沖體系，如Tris-HCl緩沖液。
6. 封閉的緩沖液一般使用帶氨基的小分子試劑，如乙醇胺、Tris等，pH在8 ~ 9室溫封閉數(shù)小時可完全封閉。推薦的封閉緩沖液為0.5 M 乙醇胺，0.5 M NaCl，pH 8.3或0.1 M Tris-HCl，pH 8.5。
7. 在偶聯(lián)中盡量使用溫和的混勻方式，如震蕩、翻轉(zhuǎn)、旋轉(zhuǎn)等。如使用磁力攪拌器或者機械攪拌，需要降低攪拌的速度，只要把填料能混勻完全懸浮起來即可，避免劇烈攪拌使凝膠微球破碎。
8. NHS-瓊脂糖凝膠FF需現(xiàn)取現(xiàn)用，避免時間過長造成活性降低。
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