生物素標記多肽
| 【編號】BK2021071405 | 【CAS號】CAS | ||
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多肽親和純化、免疫組化 (IHC)、細胞表面標記、流式細胞術(shù)/熒光激活細胞分類(FACS)。
北科納米提供生物素標記肽合成服務(wù)。通常，生物素可被標記在N端或C端(經(jīng)由Lys)。我們推薦N端標記，其標記的成
功率更高，所需時間更短，操作更簡潔。
生物素可通過各種不同的linker或spacers與多肽隔離。一般建議引入間隔器如Ahx（一個6碳鏈接器)讓生物素更穩(wěn)定
或更靈活。
北科納米提供N端或C端生物素標記：Biotin (N terminus), Lys(Biotin)(middle), Lys(Biotin)(C terminus)。
帶有l(wèi)inker(Ahx)的生物素化: Biotin-Ahx (N terminus), Lys(Ahx-Biotin)(middle), Lys(Ahx-Biotin)(C terminus)。
生物素標記肽的Pull-down實驗方案分析
生物素標記肽可與親和素磁珠共軛以生成樹脂，用于肽pulldown試驗。先把生物素標記肽上樣至Immobilized
streptavidin beads (Pierce) 錨定有親和素的磁珠上，再與細胞裂解液孵育。細胞裂解于1％（v/v）Nonidet P-40,
150 mM sodium chloride, 50 mM Tris-HCl, pH 7.5, protease inhibitors (Complete Tablets, Roche Applied
Science), 加入 1 mM sodium orthovanadate作為磷酸酶抑制劑。等量的蛋白質(zhì)分別與被錨定的多肽在4℃孵育6
小時。經(jīng)過大量洗滌，在SDS樣品buffer中煮沸，結(jié)合蛋白可從被錨定的多肽洗脫下來，或者，用50 mM
dithiothreitol將多肽與蛋白復(fù)合物從磁珠中斷開。將來自活性肽和對照目標肽pull-downs的洗脫液合并，以作進一
步的分析。
上圖為鏈霉親和素-生物素鍵力測量示意圖。由于它們異常高的親和結(jié)合性，其中*突出的配體-受體對是鏈霉
親和素-生物素（streptavidin-biotin）和親和素-生物素（avidin-biotin）。 這兩種蛋白質(zhì)都有一個四聚體的結(jié)構(gòu)，
這樣他們可以結(jié)合4個配體。
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